Procesado de muestras de sangre

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Tras la extracción de sangre, la muestra se debe procesar correctamente para realizar todos los estudios y obtener resultados fiables.

Muestras sanguíneas

Una vez obtenida la muestra, la sangre debe ponerse en los tubos que contienen el anticoagulante EDTA que generalmente lleva una tapa morada (es el anticoagulante por excelencia para exámenes hematológicos porque inhibe la coagulación de la muestra sin alterar las células) y homogeneizarse cuidadosamente, nunca agitar ya que esto también produciría su hemólisis.

Procesado de muestras de sangre Hay que asegurarse de que la relación muestra anticoagulante sea la correcta para ello hay que llenar hasta la marca indicada en el tubo. También hay que comprobar que la muestra no tenga ningún coágulo (producido por mala extracción) ni esté hemolizada (consecuencia de una agitación vigorosa, por forzar el llenado del tubo), en tal caso hay que repetir la extracción.

Para frotis sanguíneos realizar la extensión inmediatamente o refrigerar la muestra. No deberemos usar muestras de más de 3-4 días ya que un contacto prolongado con el EDTA produce una alteración de las células (tabla 2).

Coagulación

Hay que tener cuidado con los estudios de coagulación, puesto que se producen reacciones enzimáticas que están muy influenciadas por manejos inadecuados de la muestra (tabla 3).

Para evitarlo se recomienda seguir las indicaciones que se muestran a continuación:

  • Las muestras deben obtenerse en el tubo de citrato (porque es el único que no inhibe los factores de la coagulación) que normalmente es de color azul, el cual debe estar perfectamente enrasado, puesto que las pruebas son mucho más sensibles.
  • Debemos comprobar que la muestra no tenga ningún coágulo ni esté hemolizada, en tal caso repetir la extracción.
  • Homogeneizar (mover ligeramente para mezclar la muestra) suavemente. Se recomienda centrifugar la muestra pasados unos cinco minutos, separar el plasma en un eppendorf y refrigerar la muestra hasta su envío; si éste fuera a ser al día siguiente es conveniente congelarla.

Bioquímica

Procesado de muestras de sangre Las muestras se deben obtener preferiblemente en un tubo de suero (el cual no tiene ningún tipo de anticoagulante) y/o heparina si es una muestra urgente (tablas 4 y 5).

Tras la toma de la muestra en suero hay que dejar que se forme el coágulo para evitar la formación de fibrina y no agitar vigorosamente para prevenir la hemolisis. En caso de que la muestra solicitada sea una urgencia o que la prueba necesite plasma se recogerá en heparina exceptuando si se indica que sea en EDTA y se centrifugará en el momento ya que no es necesario que se forme coágulo.

Identificar correctamente la muestra y una vez centrifugado alicuotar (pipetear) en eppendorf señalando el tipo de muestra y refrigerar adecuadamente.

Procesado de muestras de sangre Las causas más frecuentes de resultados erróneos son:

  • Interferencias por hemolisis, ictericia o lipemia.
  • Muestra insuficiente.
  • Interferencias por extracción sanguínea postratamientos.

Por tanto, deberemos intentar extraer antes de cualquier tratamiento.

Pruebas especiales

En algunos casos además de las pruebas sanguíneas básicas es necesario realizar otras más específicas.

Endocrinología

Exceptuando algunas hormonas que suelen requerir unas condiciones de manejo especiales, normalmente para la recogida de muestras de endocrinología se pueden seguir las pautas explicadas en el apartado de bioquímica.

Las hormonas que habitualmente requieren un manejo especial suelen ser aclaradas por el laboratorio, de lo contrario la muestra requerida suele ser suero (tabla 6).

Serología

Las técnicas incluidas en serología son: IFI, ELISA, inmunodifusión, inmublots, aglutinación por látex, fijación de complemento… Por ejemplo, se recogen aquí pruebas como: Leishmania, Ehrlichia, Babesia canis… Estas muestras por lo general se recogerán en suero.

Procesado de muestras de sangre Estas pruebas detectan IgG (proteína producida por el organismo tras la exposición a un agente patógeno) y/o IgM (proteína presente en el organismo desde el nacimiento). Aunque la verdaderamente importante es la IgG, ya que la IgM aparece sólo durante un corto periodo de tiempo tras la infección (7 a 10 días).

La presencia de anticuerpos específicos indica una exposición previa al organismo pero no es prueba de que la infección actual esté causada por este organismo, por lo que se requiere saber si existe seroconversión. Estas pruebas se deben evaluar con muestras durante la enfermedad aguda temprana y con muestras de tres semanas después.

Toxicología y farmacología

Debido a que las proteínas transportadas en el plasma pueden producir determinadas interferencias en el test es imprescindible preguntar al laboratorio de elección el tipo de muestra necesario para cada fármaco.

La utilización de este tipo de pruebas suele realizarse para controlar la respuesta terapéutica o cuando hay una sospecha de toxicidad, por lo que concentraciones elevadas se consideran tóxicas y los valores por debajo del rango son subterapéuticas. Por ejemplo: si los valores terapéuticos de fenobarbital en perros y gatos fuesen inferiores a 15–45 μg/ ml, serían subterapéuticos, es decir, no cumplirían el efecto deseado; mientras que si superaran los 60 μg/ml se consideraría un valor tóxico.

Biología molecular

En biología molecular se utiliza la PCR (reacción en cadena de la polimerasa). Al ser una técnica que detecta ADN del agente infeccioso, el tipo de muestra dependerá del ciclo de cada organismo, por lo que cada técnica tiene un tipo de muestra preferente que puede variar según el protocolo. Aunque por regla general la muestra se recogerá en tubo de suero estéril y vacío.

Extraído de Irene Ceza Muñoz y Paula Rodríguez Campos, con la colaboración de Javier Birlanga Urban, Toma y manejo de muestras (1ª parte), Ateuves 20, pág. 24-31.  

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